2024澳门2024免费原料成功研发出双色高灵敏多瘤病毒检测项目,可通过一次检测即可得到两种病毒结果,为患者节约成本和时间。

1. 联合BKV和JCV特异性序列的检测,可同时鉴别样本中是否同时含有两种病毒

以病毒序列相似的BKV、JCV、SV40的阳性样本作为DNA模板,分别进行单重荧光定量PCR检测。在BKV模板中,只有BK Taqman探针有扩增曲线(Figure 1A);在JCV模板中,只有JC Taqman探针有扩增曲线(Figure 1B);在SV40模板中,无“S”型扩增曲线(Figure 1C)。

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Figure 1

2. 最低检出可达到102 copies

BKV、JCV重组质粒以5×101~5×107copies/µL为模板进行单重荧光定量PCR,检验该体系敏感性,由扩增曲线可以确定5×102copies/µL为最低检出量。Figure 2A为BKV病毒,Figure 2B为JCV病毒。

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Figure 2

3. 多重验证,提高检测的准确性和可靠性,防止漏检

将5×104、5×105、5×106 copies/µL三个不同浓度的BKV重组质粒和JCV重组质粒作为模板,进行3次批内和批间平行试验,计算变异系数(CV)。结果如表1所示,批次内和批次间的变异系数均小于5%。

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4. 单反应管双色荧光PCR检测

为验证双重定量结果是否会影响定量准确性,对不同浓度的BKV重组质粒和JCV重组质粒混合,分别进行双重荧光PCR和单重荧光PCR。结果如表2所示,双重PCR的Ct值与单重PCR无差别(p>0.05),双重荧光PCR可以准确对样本中BKV和JCV进行定量。

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